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晶抗生物小鼠食管上皮細胞操作步驟
更新時間:2024-03-01   點擊次數:216次

晶抗生物小鼠食管上皮細胞操作步驟

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培養工作中,主要從以下幾個方面來預防細胞支原體的污染:

A. 控制環境污染

B. 嚴格實驗操作

C. 細胞培養基和器材要保證無菌

D. 在細胞培養基中加入適量的抗生素

E. 避免細胞污染,可以從預防著手,超凈工作臺物品放置要合理、進入細胞房要換鞋和穿實驗服、實驗員戴手套后要用酒精等消毒、避免細胞交叉污染等等

培養準備和安裝過濾器:

清洗好過濾器,干燥,放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜,用布包裝好,15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內打開過濾器架好,膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中,出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾,過濾后要檢查濾膜是否完好無損。

保存應用及安全性:

保存應用:新鮮細胞,請于收到后放入二氧化碳培養箱內靜置2-3小時后再進行實驗操作;如是凍存細胞,收到后可放入液氮或-80℃冰箱保存也可進行復蘇操作。

安全性:所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

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細胞復蘇步驟:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

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